探究?实践 DNA 片段的扩增及电泳鉴定
高三生物·基因工程·难度 4/5·约 40 分钟
利用 PCR 在体外扩增 DNA 片段，再用琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物。 一、PCR 扩增 步骤 | 温度 | 作用 | ---|---|---| 预变性 | 94 ℃ | 使模板 DNA 充分变性 | 变性 | 94 ℃ | 双链 DNA 解开 | 复性 | 55 ℃ 左右 | 引物与模板结合 | 延伸 | 72 ℃ | 在 DNA 聚合酶作用下合成子链 | 最后延伸 | 72 ℃ | 使子链充分延伸 | 二、琼脂糖凝胶电泳 步骤 |…
学完你应该能
- 说明 PCR 反应体系的组成和各温度阶段的作用
- 规范完成 PCR 扩增操作
- 阐明琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 的原理
- 规范完成电泳操作并与标准参照物比较分析结果
- 分析电泳结果异常的原因
常见易错点
认为 DNA 在电泳中向负极迁移「最高频错误」：DNA 带负电，向正极迁移，点样孔应靠近负极。 认为分子越大迁移越快：分子越小迁移越快，距离点样孔越远。 记错 PCR 各阶段温度：变性约 94 ℃、复性约 55 ℃、延伸约 72 ℃。 电泳时不加标准参照物：需要用 Marker 判断扩增片段大小。
建议先学
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